分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃設(shè)計(jì)及凈化工程裝修要求

實(shí)驗(yàn)室潔凈工程裝修，實(shí)驗(yàn)室凈化工程設(shè)計(jì)主要是由我國(guó)空氣潔凈等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分為：100級(jí)、1000級(jí)、10000級(jí)、100000級(jí)等等。標(biāo)準(zhǔn)則劃分為：1級(jí)、2級(jí)、3級(jí)、4級(jí)、5級(jí)為準(zhǔn)。

基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室（PCR實(shí)驗(yàn)室）：
PCR是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法，并沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求，但是為了避免各個(gè)試驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性，宜采用全送全排是氣流組織形式。同時(shí)，要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。

試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)：
該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)，不得經(jīng)過(guò)其它區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。對(duì)氣流壓力的控制，本區(qū)并沒(méi)有嚴(yán)格的要求。

標(biāo)本制備區(qū)：
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸（RNA、DNA）提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA時(shí)cDNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為相對(duì)于臨近區(qū)域?yàn)檎龎?，以避免從鄰近區(qū)域進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)域內(nèi)不必要的走動(dòng)。

擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)：
擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)：該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為NDA或cDNA擴(kuò)增。此外，已制備的DNA模板和合成的cDNA（來(lái)自樣本制備區(qū)）的加入和主反應(yīng)混合液（來(lái)自試劑貯存和制備區(qū)）制備成反應(yīng)混合液等也可以在本區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。在巢氏PCR測(cè)定中，通常在第一輪擴(kuò)增后必須打開(kāi)反應(yīng)管。因此巢氏擴(kuò)增有較高的污染危險(xiǎn)性，第二次加樣必須在本區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)域漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。

擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測(cè)定。如使用全自動(dòng)封閉分析儀器檢測(cè)，此區(qū)域可不設(shè)。本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源，因此對(duì)本區(qū)的壓力梯度的要求為：相對(duì)于臨近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)域擴(kuò)散至其它區(qū)域。

完備的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施：
完備的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施是保證實(shí)驗(yàn)工作的必要條件，應(yīng)根據(jù)各個(gè)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器，如超凈工作臺(tái)、生物安全柜、離心機(jī)、加樣器等。

實(shí)驗(yàn)室凈化工程設(shè)計(jì)主要是通過(guò)人為的手段，應(yīng)用潔凈技術(shù)實(shí)現(xiàn)控制室內(nèi)空氣中塵埃、含菌濃度、溫濕度與壓力、以達(dá)到所要求的潔凈度、溫濕度和氣流速度等環(huán)境參數(shù)?？諝鉂崈舳仁侵笣崈艨諝猸h(huán)境中空氣含塵量程度，空氣潔凈度的級(jí)別以含塵濃度劃分。潔凈度是指每升空氣中所含粒徑≥0.5um的塵粒的總顆粒。
實(shí)驗(yàn)潔凈室一般實(shí)施兩級(jí)隔離，一級(jí)隔離通過(guò)生物安全柜、負(fù)壓隔離器、正壓防護(hù)服、手套、眼罩等實(shí)現(xiàn);二級(jí)隔離通過(guò)實(shí)驗(yàn)室的建筑、空調(diào)凈化和電氣控制系統(tǒng)來(lái)實(shí)現(xiàn)。但由于凈化空調(diào)需要風(fēng)量小為了安全起見(jiàn)，風(fēng)量都按大的估算，一般都要超過(guò)規(guī)范規(guī)定，物別是百級(jí)以上，冷熱負(fù)荷在要求不是很嚴(yán)格的情況可能估算，現(xiàn)在專門有凈化空調(diào)機(jī)組，可以直接利用。二級(jí)~四級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室應(yīng)實(shí)施兩級(jí)隔離。一般實(shí)驗(yàn)室裝備有:超凈工作臺(tái)、生物安全柜、邊臺(tái)或不銹鋼操作臺(tái)、洗滌臺(tái)等。

以PCR實(shí)驗(yàn)室為例(PCR即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))，是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法，也是生物學(xué)、醫(yī)學(xué)臨床等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加，實(shí)驗(yàn)室通常分為四個(gè)區(qū)域，即：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)(如使用全自動(dòng)分析儀，區(qū)域可適當(dāng)合并)。進(jìn)入各個(gè)區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行，不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開(kāi)時(shí)，不得將工作服帶出。

實(shí)驗(yàn)室潔凈裝修，試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備室(標(biāo)本制備區(qū))，儀器主要配置有：冷凍離心機(jī)、生物安全柜、冰箱、可移動(dòng)紫外燈、全自動(dòng)力核酸蛋白純化儀、專用工作服和工作鞋等。擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)配置有：冰箱、高速離心機(jī)、超凈工作臺(tái)、PCR儀(要求負(fù)壓狀態(tài))、可移動(dòng)紫外燈、微量加樣器、核酸擴(kuò)增儀等。擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)主要配置有：移液器、振蕩器、超凈工作臺(tái)、毛細(xì)管電泳儀、冰箱、離心機(jī)、微量加樣器、可移動(dòng)紫外燈等。